フィブリン重合 fibrin polymerization

１）機序
フィブリノゲン(Fbg)はトロンビン(活性化凝固第Ⅱ因子)によりAα16R(Arg)-17G(Gly)間が切断され16アミノ酸からなるフィブリノペプチドA (FPA)を放出し、遅れてBβ14R(Arg)-15G(Gly)間が切断され14アミノ酸からなるフィブリノペプチドB(FPB)を放出する。FPAの放出によりFbgはFibrin(Fbn)モノマーに転換し、α鎖に露呈された”knob-A”（Gly-Pro-Arg）が他のFbnモノマーのγ鎖に存在する”hole-a”と相補的に結合すること（A-a結合）で二本鎖のプロトフィブリルを形成する。Fbnモノマーが14-16個程度つながると、FPB放出により露呈された”knob-B”(Gly-His-Arg)と他のFbnモノマーのβ鎖に存在する”hole-b”との相補的な結合（B-b結合）により、プロトフィブリル同士の重合(lateral aggregation)が急速に進み、Fbn網（Fbn clot）が形成される。さらに活性化凝固第ⅩⅢ因子のトランスグルタミナーゼ作用によりFbn中のγ鎖同士（γ398Gln/399Gln-γ406Lys）が架橋されDダイマー（あるいはγダイマー）が形成され安定化Fbnとなる。

２）フィブリン重合反応の実施（図）
一般的には（精製）Fbg溶液に低濃度トロンビンを添加し、350 nmの波長でFbn形成による濁度の上昇を測定する。現在の基本的な反応条件は、緩衝液：0.02 M HEPES(pH7.4)、NaCl濃度：0.12 M、 Ca²⁺：1.0 mM、 Fbg：0.18 mg/ml、トロンビン：0.05 U/mlである。図中のLag periodとは、Fbnモノマーから二本鎖プロトフィブリルが形成され、さらにFbnモノマーが14-16個程度の長さにつながり、lateral aggregationが起こるまでの時間である。異常Fbgの機能を見るためには必須の検査であり、Lag period、傾き、ΔAbsの３パラメーターにより評価する。

３）フィブリン重合反応の変動要因
フィブリン重合反応はpH及び緩衝液、NaCl、Ca²⁺、フィブリノゲン、トロンビンの各濃度により影響を受ける。とりわけ、異常Fbgでは正常Fbg に比べてNaClやCa²⁺濃度の影響を強く受けることが知られている。